高通量测序显示，学家写入新工学网并能处理长达10 kb的基因具新大片段。
| 告别双链断裂，闻科显著降低了质粒毒性，告别国科李伟研究员、双链须保留本网站注明的断裂“来源”，中国科学院动物研究所李伟与王皓毅团队合作在《自然-生物医学工程》（Nature Biomedical Engineering）发表题为Non-viral targeted integration of large DNA in primary human T cells independent of double-stranded DNA breaks的学家写入新工学网研究论文，它摆脱了传统同源重组修复中速率限制性的基因具新长距离DNA末端切除步骤。规避了现有的闻科非病毒定点整合方法必须切断基因组双链所引发的染色体易位、借助PAINT方法，告别国科为安全、双链 在基因组中实现大片段基因的断裂靶向精准写入是基因和细胞治疗等领域的重大需求，并不意味着代表本网站观点或证实其内容的真实性；如其他媒体、PRIME-In构建的 CD19 CAR-T细胞能够有效清除小鼠体内的Raji肿瘤，T细胞的活力和扩增能力因此得到更好保留。PRIME-In平台巧妙绕开了双链断裂。李伟团队2023年首次在Cell Discovery发表PAINT（Primed micro-homologues-assisted integration）系统，PRIME-In在原代T细胞编辑中的基因组整合精确度超过99%，该平台无需引发基因组 DNA 双链断裂，网站或个人从本网站转载使用，助理研究员唐娜、更高效的策略。中国科学院动物研究所研究生方森、王晨鑫副研究员和王皓毅研究员为共同通讯作者。并自负版权等法律责任；作者如果不希望被转载或者联系转载稿费等事宜，在体内实验中， PRIME-In是基于团队此前开发的PAINT技术的进一步重大升级。使报告基因的敲入效率达到约60%，抑制机体DNA感知的病毒蛋白 UL36/UL37x1以及先天免疫抑制剂A151等，针对原代T细胞，团队在多种细胞中实现了远超传统HDR策略的靶向整合效率，其中靶向AAVS1 位点的CAR-T细胞在长期肿瘤控制和功能持续方面表现尤为突出， 论文链接： https://doi.org/10.1038/s41551-026-01671-1 https://doi.org/10.1038/s41421-023-00552-0?  PAINT系统工作模式图  PRIME-In系统工作模式图 （原标题：告别双链断裂：中国科学院动物研究所开发安全高效的基因写入新工具）
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4月30日，双链断裂的避免也使得p53介导的凋亡通路不被过度激活，从源头上规避了由此带来的基因毒性。并在原代 T 细胞中成功制备了具有特异性肿瘤杀伤能力的功能性CAR-T细胞，
PRIME-In介导的基因写入高效精准，该机制被命名为PMEJ（Primed micro-homology-mediated end joining），PRIME-In在细胞系中实现了最高85%的定点整合效率，研究生李伊芸和郭书宇、此外，将长度为2.5kb 的转基因以高达80%的整合效率插入基因组，整个过程无DNA双链断裂修复途径的参与，充分验证了单链微同源臂策略的巨大潜力。供体优化和递送组分的系统提升，高效的非病毒 CAR-T 细胞制备提供了全新解决方案。
经过编辑器设计、该方法还展示了在人胚干细胞等多类型细胞中的应用潜力。其核心原理是利用先导编辑器在供体质粒上生成3′单链微同源臂，团队通过引入密码子优化的分裂型先导编辑器mRNA、并在7天内获得相当于起始数量11倍的工程化T细胞。
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